Loading...

Optimization of Asparaginase Immobilization on Carrier

Bahraman, Fatemeh | 2009

2357 Viewed
  1. Type of Document: M.Sc. Thesis
  2. Language: Farsi
  3. Document No: 46348 (06)
  4. University: Sharif University of Technology
  5. Department: Chemistry Engineering
  6. Advisor(s): Alemzadeh , Iran; Kazemi, Akhtarolmolok
  7. Abstract:
  8. The enzyme L-asparaginase (L-asparagine amidohydroxylase , EC 3.5.1.1) is utilizable in the treatment of acute childhood lymphoblastic leukaemia. L-asparaginase catalyses the hydrolysis of the amino acid L- asparagines to L-aspartic acid and ammonia. Unlike normal cells,malignant cells which can only slowly synthesize L-asparagine , are killed by lacking exogenous supply. In contrast, normal cells are protected from Asn-starvation due to their ability to produce this amino acid.
    In this study , L- asparaginase from E.coli, was immobilized onto a polymeric compound, poly(vinyl alcohol)(PVA) with cross-linking agent glutaraldehyde and calcium alginate beads .. Herein ,with the use of the different concentrations of glutaraldehyde, the effect of matrix concentration and with the use of the different speeds for shaking, the effect of physical parameters were studied on immobilization efficiency. Response surface methodology (RSM) and central composite design(CCD) were used to optimize immobilization of anti-leukaemia L-asparaginase from E. coli onto calcium alginate beads. Independent variables were the amount of sodium alginate, calcium chloride and enzyme loading. predicted values thus obtained were closed to the experimental value indicating suitability of the model. The optimum immobilization conditions were as follows: sodium alginate concentration 1.98%(w/v), calcium chloride concentration 3.70%(w/v) and enzyme load 46.91%(v/v). The highest residual L-asparaginase activity % (immobilized enzyme activity/ free enzyme activity) obtained was 34.49%
  9. Keywords:
  10. L-Asparginase Enzyme ; Immobilization ; Poly Vinyl Alcohol ; Calcium Alginate

 Digital Object List

 Bookmark

  • مقدمه:
  • فصل اول: کلیات
  • 1-1آنزیم
  • شکل1-1- توزیع کاربرد آنزیم ها در صنایع مختلف (1)صنایع دارویی، (2)صنایع غذایی، (3)صنایع تولید مواد شوینده، (4)صنایع چرم و کاغذ، (5)صنایع نساجی[2]
    • 1-1-1طبقه بندی آنزیم
  • 1-2-تثبیت آنزیم
    • 1-2-1- مزایا و معایب تثبیت آنزیم
    • 1-2-2- روشهای تثبیت
  • شکل1-2- انواع روش های تثبیت
    • 1-2-2-1-جذب سطحی
    • 1-2-2-2-بدام اندازی
    • 1-2-2-3-ترسیب فیزیکی آنزیم ها برای استفاده در محیط های آلی
    • 1-2-2-4-پیوند کووالانس
    • 1-2-2-5 اتصال جانبی
    • 1-2-2-6-تثبیت توسط غشاها
    • 1-2-2-7-تثبیت در سیستم های دوفازی
    • 1-2-3-انتخاب شرایط مناسب تثبیت
    • 1-2-3-حامل
      • 1-2-3-1-حامل آلژینات
  • فصل دوم: آنزیم ال- آسپاراژیناز
  • 2-1- آنزیم ال- آسپاراژیناز
  • 2-2- مکانیسم فعالیت ضد سرطانی ال- آسپاراژیناز
  • 2-3- منابع تولید آنزیم ال- آسپاراژیناز
  • 2-4- ساختار آنزیم
  • 2-5- کاربرد درمانی
  • 2-6- تثبیت
  • 2-7- سنجش فعالیت آنزیم ال- آسپاراژیناز
  • فصل سوم: مواد وروش ها
  • 3-1- مواد شیمیایی مورد استفاده
  • 3-2- تجهیزات و وسایل مورد استفاده
  • 3-3- تولید آنزیم ال- آسپاراژیناز
  • 3-4- اندازه گیری میزان پروتئین
    • 3-4-1- روش لوری
      • 3-4-1-1- محلول های مورد نیاز در روش لوری
      • 3-4-1-2- روش کار
  • 3-5- اندازه گیری فعالیت آنزیم
    • 3-5-1- تهیه محلول بافر
    • 3-5-2- تهیه معرف نسلر41F
    • 3-5-3- تهیه محلول آسپاراژین
    • 3-5-4- تهیه محلول تری کلرو استیک اسید
    • 3-5-5- روش کار
    • 3-5-6- تهیه محلول های استاندارد آمونیاک
  • 3-6- تثبیت آنزیم ال- آسپاراژیناز در پلی وینیل الکل
    • 3-6-1- روش تهیه هیدروژل
    • 3-6-2- اندازه گیری میزان تورم هیدروژل در دما های مختلف
    • 3-6-3- تثبیت آنزیم
  • 3-7- تثبیت آنزیم ال- آسپاراژیناز در آلژینات کلسیم
    • 3-7-1- تهیه ژل آلژینات و تثبیت آنزیم در آن
  • فصل چهارم:نتایج و مشاهدات
  • 4-1- رسم منحنی استاندارد لوری
  • 4-2- رسم منحنی استاندارد آمونیاک
  • 4-3- نتایج مربوط به تثبیت آنزیم در پلی وینیل الکل
    • 4-3-1- بررسی تاثیر غلظت گلوتارآلدهید
    • 4-3-2-اندازه گیری میزان تورم هیدروژل در دماهای مختلف
    • 4-3-3- بررسی تاثیر غلظت آنزیم
    • 4-3-4- بررسی تاثیر pH
    • 4-3-5- بررسی تاثیر دور همزن در فرایند تثبیت
  • 4-4- نتایج مربوط به تثبیت آنزیم در ژل آلژینات کلسیم
  • 4-5- نتیجه گیری و پیشنهادات
  • منابع:
  • پیوست
...see more