Loading...

Experimental Investigation on Growth and Control of Animal Cells Attached on Scaffold

Solmaz, Naseri | 2013

2160 Viewed
  1. Type of Document: M.Sc. Thesis
  2. Language: Farsi
  3. Document No: 44668 (06)
  4. University: Sharif University of Technology
  5. Department: Chemical and Petroleum Engineering
  6. Advisor(s): Vossoughi, Manoochehr; Alamzadeh, Iran
  7. Abstract:
  8. Major bone defects resulted from diseases or hurts that can not heal naturally, requaire bone transplantation. golden standard for transplantation is autologus one but it has some disad-vantages such as economic burden, the lack of graft source, surgery on patient, and so on. so exploring altrnative ways led to exploit stem cells.traditionally bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) used for stem cell-bsaed bone regeneration. bone marrow aspiration to aquaire stem cells is painfull and give a population of cells such as hematopoetic cells that requaire to seperate and can not be handled in first passages. MSCs can be substituted by multipotent adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) in bone repair because of ablility of differentiate to osteoblasts, easily accesable, not need to surgery. in vitro, ADSCs requaires osteogenic medium and a substrate like ECM 1 to adhere, proliferate and differentiate. in this study ADSCs were cultured on 4 types of electrospun scaffolds to examine effect of scaffold on differentiation and mineralization. first biocampatibility were tested using MTT assay then differentiation and mineralization were examined by ALP assay on day 0, 4, and 10 and on day 10 by Alizarin Red staining, respectively. 3-D scaffolds mimic ECM well and their porosity promotes cell proliferation, adhesion and migration. effect of these type of 3 layer electrospun scaffolds on the osteoblastic differentiation was studied and showed ele- vated level of the expression of the genes specific to the osteoblasts like RUNX2, Collagen type I, and Osteopontin using Real Time-PCR
  9. Keywords:
  10. Stem Cell ; Biocompatibility ; Differentiation ; Mineralization ; Alkaline Phosphatas Assay ; In-Vitro ; MTT Assay

 Digital Object List

 Bookmark

  • مقدمه
    • کشت سلول‌های حیوانی
      • کشت اولیه
      • خط سلولی
      • سویه سلولی
    • تاریخچه کشت سلولی
    • انتخاب گونه مناسب به عنوان منبع سلولی
    • سلول‌های بنیادی
    • منبع استخراج سلول‌های بنیادی
      • سلول‌های بنیادی مزانشیمی
    • تمایز
      • تمایز سلول‌های بنیادی مزانشیمی به رده استخوان‌ساز
      • معدنی شدن
      • فعالیت آلکالاین فسفاتاز
    • مکانیزم اثر مکمل‌های استخوان‌ساز در تمایز
      • آسکوربیک اسید
      • دگزامتازون
      • بتا-گلیسرو فسفات
    • شرایط آزمایشگاهی لازم برای تمایز یافتن به سلول استخوان‌ساز
    • ضرورت داربست در کشت سلول‌های بنیادی
    • ویژگی‌های یک داربست خوب برای کشت سلولی
    • هدف
  • مواد و روش‌ها
    • تجهیز و راه‌اندازی آزمایشگاه فرایندهای سلول‌های بنیادی
    • خط‌های سلولی و کشت اولیه
    • کشت سلول‌ها
      • ذوب کردن سلول‌های منجمد
      • استخراج سلول‌های بنیادی از بافت چربی خرگوش
      • تهیه محیط کشت
    • ترسیم منحنی رشد سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق شده از بافت چربی خرگوش
    • ‌‌آماده‌سازی داربست‌ها
    • تعیین زیست‌‍‌سازگاری داربست
      • شمارش و انتقال سلول‌ها به روی داربست
      • آزمون زیست پذیری
      • چیدمان آزمایش
      • تهیه محلول رنگ اِم‌تی‌تی
    • بررسی چسبندگی سلول به داربست
      • آماده سازی سلول‌ها برای تصویر‌برداری بوسیله میکروسکوپ الکترونی
    • بررسی تأثیر داربست در تمایز سلول‌های بنیادی مزانشینی مشتق شده از بافت چربی خرگوش به رده استخوانی
      • آزمون فعالیت آلکالاین فسفاتاز
      • رنگ‌آمیزی داربست معدنی شده با رنگ الیزرین رد
    • بررسی بیان ژن استخوانی توسط سلول‌های بنیادی استخراج شده از بافت چربی خرگوش کشت داده شده بر روی داربست 3 لایه الکتروریسی شده
      • استخراج آر ‌اِن ‌اِی
      • بررسی کمّی آر اِن اِی استخراج شده
      • واكنش رونويسی معكوس
      • طراحی پرایمر
      • واکنش ریل تایم-پی‌سی‌آر
  • نتایج و بحث
    • زیست‌سازگاری
    • منحنی رشد سلول‌های بنیادی مزانشینی مشتق شده از بافت چربی خرگوش
    • مقایسه قطر الیاف داربست پلی کاپرولاکتونی الکتروریسی شده با یک نوع داربست طبیعی
    • چسبندگی سلول به داربست
    • آلکالاین فسفاتاز
    • معدنی شدن داربست
    • بیان ژن
  • نتیجه‌گیری نهایی و پیشنهادات
    • نتیجه‌گیری نهایی
    • پیشنهادات
  • مراجع
...see more